Em experimentos de cultura de células, as pipetas são usadas com muita frequência e a precisão de sua operação afeta diretamente a confiabilidade e a repetibilidade dos resultados experimentais. A seguir, são apresentadas algumas dicas para operação de pipeta na cultura de células, que espero que seja útil para o seu experimento.
1. Escolha a pipeta certa e dica
- Seleção de pipeta: escolha a pipeta certa de acordo com o volume de líquido a ser transferido. A faixa normal de volume operacional da maioria das pipetas é 10-100% do intervalo indicado. Tente evitar definir o volume de uma pipeta para menos de 10% do volume máximo e use uma pipeta de pequena faixa para operações de pipetas de pequeno volume.
- Seleção da dica: escolha uma ponta que corresponda à pipeta e verifique se a ponta é firmemente inserida para evitar vazamentos de ar. Além disso, para experimentos específicos (como operação asséptica), as dicas autoclavadas devem ser selecionadas.
2. Enxágue a ponta
Enxágue a ponta 2-3 vezes para formar um filme homogêneo na dica, melhorando assim a precisão da pipetagem. Além disso, pode neutralizar o efeito capilar em micropipetas, o que pode tornar a temperatura dentro da ponta consistente com a temperatura da amostra para pipetagem de grande volume. Deve -se notar que a enxágue pode ter um efeito adverso nos resultados ao pipetar soluções quentes e frias.
3. Controle a velocidade de aspiração e distribuição
- Pressione suave: Pressione e solte o botão de controle suave e continuamente, em vez de pressioná -lo e liberá -lo repentinamente. Isso pode evitar a formação de bolhas e melhorar a precisão da pipetagem.
- Pausa: Após aspirar o líquido, deixe a ponta no líquido por cerca de 1 segundo, especialmente para esses líquidos viscosos. Puxar imediatamente a ponta pode resultar em aspiração líquida incompleta.
4. Preste atenção à profundidade da imersão da ponta
- Micropipette: a ponta deve ser imersa 2-3 mm.
- Pipeta de grande alcance: a profundidade de imersão deve ser 5-6 mm. Se a ponta estiver imersa demais, o ar dentro da ponta será comprimido, fazendo com que muito líquido seja aspirado. O líquido restante na superfície da ponta também pode afetar os resultados.
5. Operação vertical
Mergulhe a pipeta na amostra o mais verticalmente possível, de preferência sem se desviar da posição vertical em mais de 20 graus. Além de melhorar a precisão do volume da pipeta, isso também pode impedir que o líquido flua para a pipeta devido à inclinação excessiva.
6. Observe a ponta da pipeta
Ao se preparar para descarregar o líquido, preste atenção se há excesso de gotículas conectadas à superfície da ponta da pipeta. Após descarregar o líquido, a ponta da ponta da pipeta pode ser tocada na lateral do recipiente para garantir que a descarga seja completa o suficiente para impedir que a última gota de líquido permaneça na ponta da ponta da pipeta.
7. Escolha o método apropriado de pipetagem
- Método de sucção positiva: Adequado para a maioria dos líquidos. Ao chupar líquido, pressione o botão para o primeiro ponto de parada e solte lentamente o botão para retornar ao ponto de partida. Em seguida, pressione o botão no primeiro ponto de parada para descarregar o líquido, pausar por um tempo e continue pressionando o botão até o segundo ponto de parada para explodir o líquido restante. Finalmente solte o botão.
- Método de sucção para trás: Adequado para líquidos altamente viscosos, líquidos biologicamente ativos, líquidos de espuma facilmente ou quantidades extremamente pequenas de líquidos. Primeiro sugue mais líquido que o intervalo definido e não sopra o líquido restante ao transferir o líquido.
8. Mantenha a pipeta limpa e mantida
- Calibração regular: depois de usar a pipeta por um período de tempo, ela precisa ser calibrada para garantir sua precisão.
- Limpeza: Após cada uso, a pipeta deve ser limpa a tempo para evitar o líquido residual de contaminar o próximo experimento.
9. Operação asséptica
Na cultura de células, a operação asséptica é muito importante. Ao usar uma pipeta, preste atenção aos seguintes pontos:
- Desinfecção: Antes de usar, limpe a pipeta e a ponta com uma bola de algodão álcool para desinfecção.
- Evite contaminação cruzada: use uma nova dica para cada amostra para evitar a contaminação cruzada.
Com as dicas acima, você pode usar pipetas para experimentos de cultura de células com mais precisão e eficiência e melhorar a confiabilidade e a repetibilidade dos resultados experimentais. Espero que essas dicas o ajudem!