Em química, biologia e medicina, uma pipeta é um instrumento típico de laboratório usado para fornecer um volume predeterminado de líquido, geralmente como um dispensador de meio. O sucesso dos seus resultados de pipetagem depende da precisão com que você lê o volume da pipeta ao realizar estudos delicados. Usar instrumentação precisa e de alta qualidade é a melhor maneira de garantir que os volumes da pipeta sejam lidos corretamente. À medida que os requisitos de laboratório para precisão e exatidão continuam a aumentar, entender e aperfeiçoar as técnicas ideais de pipetagem é essencial.
Pipetas são usadas em pesquisas científicas e exigem alta precisão para medir e transferir corretamente pequenas quantidades de líquido.
No entanto, o mau funcionamento do equipamento ou erro do operador podem ser a causa de erros de medição de pipetas. Quaisquer alterações no volume dispensado podem ter impacto nos resultados e na reprodutibilidade de experimentos, como os de qPCR.
Fatores que afetam a precisão da pipeta:
Temperatura
A pipetagem precisa é muito afetada pela temperatura. A diferença de temperatura entre o dispositivo de entrega e o líquido é o fator mais influente. Os efeitos específicos do caso da expansão térmica ocorrem no espaço de ar (volume de ar morto) entre a superfície do líquido e o pistão. Entre outras consequências, isso pode reduzir ou aumentar a quantidade de líquido aspirado para a ponta.
Densidade
A quantidade de líquido aspirado para dentro da ponta é afetada pela densidade (razão massa/volume). Líquido menos denso é aspirado do que um procedimento similar usando água. Para líquidos menos densos, os resultados são opostos. Isso é causado pelo volume de ar morto flexível e pela gravidade da Terra. A densidade do líquido também muda com a temperatura. Normalmente, a densidade de um líquido também muda com a temperatura. A 20 graus /68 graus F, a água normalmente tem uma densidade de 0.998 kg/dm3, o etanol tem uma densidade de 0,79 kg/dm3 e o ácido sulfúrico (95-98% h2SO4) tem uma densidade de 1,84 kg/dm3.
Alto
A precisão é afetada pela pressão do ar e altitude geográfica. Quanto maior a altitude, menor a pressão do ar e menor o fator de conversão.
Além disso, os pontos de ebulição de alguns líquidos caem significativamente até próximo da temperatura ambiente, aumentando significativamente as perdas por evaporação.
Evaporação de reagentes
Reagentes altamente voláteis absorvem vapor, que entra na ponta e aumenta a pressão interna. Portanto, erros ocorrem quando o líquido é espremido devido ao aumento da pressão.
Modo de pipetagem incorreto selecionado
Durante a pipetagem, os operadores frequentemente tomam decisões aleatórias ou subjetivas sobre usar o modo reverso ou direto. No entanto, amostras viscosas devem ser as únicas a usar o modo reverso. No modo reverso, o êmbolo é totalmente pressionado (após a primeira parada) para aspirar a amostra e, então, apenas parcialmente pressionado (até a primeira parada) para entregar a amostra. Portanto, usar o modo direto com fluidos viscosos resultará em subentrega, enquanto usar o modo reverso com soluções aquosas resultará em superentrega.
Pipetagem de inclinação
Perda de amostra ocorre quando a ponta da pipeta entra em contato com a parede do recipiente durante a aspiração. Além disso, ao pipetar pequenos volumes, retirar a pipeta em um ângulo pode causar alterações de volume devido aos efeitos da tensão superficial. Puxar a pipeta diretamente do recipiente reduz erros.